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本制品是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒，可以从除了大型真菌（蕈菌）以外的各种小型真菌（丝状真菌等）中提取膜蛋白。优化的裂解液配方可以充分释放各种有隔膜菌丝和无隔膜菌丝蛋白以及各种菌丝变态体蛋白中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完！

• 仪器准备：离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒；
  
• 试剂准备：PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒；
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套。

• 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
  
• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
  
• 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
  
• 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
  
• 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
  
• 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 提取液A在使用前须一直置于2～8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
  
• 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
  
• 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

• 提取液准备：
  每500μL冷的提取液A和C中各加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  
• 收集50～200mg真菌样本，用PBS洗2次，在4℃，5000×g条件下离心5分钟，小心吸取PBS，尽可能吸干，收集菌体。
  
• 加入500μL冷的提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  
• 在2～8℃低温条件下持续振荡1～2小时。
  
• 将提取液在2～8℃下10000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入5μL抽提液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃条件下1000×g离心5分钟。
  
• 此时溶液分为2层，小心移除上层，留下下层管底部大约50μL液体。
  
• 用1～2倍体积冷的膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

• 蛋白浓度低？
  膜蛋白丰度较低，需要尽可能真菌上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。